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探究改良EBER原位杂交技术在鼻咽肿瘤病理诊断中的应用论文

发布时间:2020-05-22 12:55:50 文章来源:SCI论文网 我要评论














SCI论文(www.scipaper.net):

摘要:目的分析研讨改良EBER原位杂交技术在鼻咽肿瘤病理诊断中的作用。方法随机从我院2016年5月至2018年8月收治的鼻咽疾病患者中抽取90例进行讨论,患者均接受EBER原位杂交技术检测,分析EBER检测结果。结果90例患者均接受改良EBER原位杂交技术检测,21例NBLA患者中共3例患者为阳性(14.29%),呈灶状、散在阳性;32例NPC患者中,均为阳性(100.00%);22例DLBCL患者中2例患者为散在阳性(9.09%);15例ENKL患者中,均为强阳性(100.00%)。NBLA阳性率14.29%低于NPC阳性率100.00%,DLBCL阳性率9.09%低于ENKL阳性率100.00%,数据差异较大(P<0.05)。结论临床检查鼻咽肿瘤病理状况可考虑采用改良EBER原位杂交技术,操作简单,稳定性好,杂交时间短,灵敏度和准确性高,可为临床鉴别和诊断鼻咽肿瘤提供依据。

关键词:鼻咽;肿瘤;病理;EBER原位杂交技术

本文引用格式:张卫东.探究改良EBER原位杂交技术在鼻咽肿瘤病理诊断中的应用[J].世界最新医学信息文摘,2019,19(53):116,119.

0引言

人体鼻咽部处于软腭上、鼻腔后的咽腔,具有部位隐蔽、构成复杂的特征,受EB病毒感染、饮食习惯、环境因素等影响,鼻咽癌多发于此部位。EBER显色原位杂交技术(CISH)可定位,用此方式检查,可确定细胞、组织与病毒间的关系,目前,医学界公认的标准方式之一则为EBER原位杂交方式。常规EBER原位杂交检测方式操作复杂,杂交时间较长,易导致检验过程和结果不稳定或误差[1],影响疾病预后和治疗。经医学界各医学者对常规EBER原位杂交检测方式改良优化后,已取得了一定认可和地位。为此,本研究共纳入90例鼻咽部疾病患者重点讨论改良EBER原位杂交技术诊断鼻咽肿瘤病理的作用,具体报告如下。

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1资料及方法

1.1一般资料


随机从我院2016年5月至2018年8月收治的鼻咽疾病患者中抽取90例进行讨论,患者均接受鼻咽部病理组织活检,用中性甲醛溶液10%固定后,石蜡包埋切片后染色,厚度≤3μm,根据WHO组织制定的淋巴瘤分类诊断标准,用免疫组织化学标记物进行检测,确诊90例患者:鼻咽黏膜慢性炎或合并良性淋巴组织增生(NBLA)共21例,未分化型非角化性鼻咽癌(NPC)共32例,弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)共22例,结外NK/T鼻型淋巴瘤(ENKL)共15例。排出已接受放化疗治疗者。90例鼻咽疾病患者中包含男性59例,女性31例,年龄13~67岁,平均(45.3±1.2)岁。各患者各项资料均满足本研究要求和标准。

1.2方法

试剂:ZLI-9013胃酶工作液、ISH-5022-S型EBER原位杂交试剂盒、S500-24型原位杂交仪。

改良检测步骤:连续切片2~3μm,烤片≥2h(温度为58℃)。用二甲苯中做脱蜡处理2次,每次10min,放入无水乙醇内5min,共2次,干燥处理8min左右。原位杂交仪内37℃胃酶工作液内消化切片≥0.5h。用PBS溶液浸洗3次,每次2min,脱水处理后,在空气内做干燥处理。加入EBER探针10μL,盖玻片后做封边处理,杂交处理3h以上。完成杂交后,将橡胶水泥去除,用PBS液浸泡,自然脱落盖玻片,再用PBS液浸洗3次,每次2min滴加抗地高辛二抗,孵育0.5h以上,用PBS液浸洗3次,每次2min,显色后,做复染、脱水、透明、封片等处理,判定结果。

1.3指标判定

本次检测均由我院2名检验科专业且经验丰富的医生负责,EBER阳性:信号显示在细胞核,且颜色为深棕色。

1.4统计学方法

用统计学软件(SPSS13.0版本)分析数据,2检验计数资料,表示为(%),t检验计量资料,表示为(±s),若P<0.05则有统计学意义。

2结果

90例患者均接受改良EBER原位杂交技术检测,21例NBLA患者中共3例患者为阳性(14.29%),呈灶状、散在阳性。32例NPC患者中,均为阳性(100.00%)。22例DLBCL患者中2例患者为散在阳性(9.09%),15例ENKL患者中,均为强阳性(100.00%)。NBLA阳性率14.29%低于NPC阳性率100.00%,DLBCL阳性率9.09%低于ENKL阳性率100.00%,数据差异较大(P<0.05)。

3讨论

EBV编码的mRNA则为EBER,高拷贝存在于感染EB病毒后细胞核内。按照EBER RNA探针,可将其用于细胞涂片、冷冻切片、石蜡切片,其灵敏度、特异性较高,此为临床测定EBV的一项金标准,已在医学界得到广泛应用和一定认可。

改良EBER原位杂交检测与常规杂交检测比较,杂交时间更短,由原来的16h缩短为3h,操作步骤得到简化[2]。常规洗涤方式为58℃TBS液内洗涤,更改为常温PBS液内洗涤则可。此次研究结果显示,NBLA阳性率14.29%低于NPC阳性率100.00%,DLBCL阳性率9.09%低于ENKL阳性率100.00%,数据差异较大(P<0.05)。EBER原位杂交技术检测NBLA阳性,可推测存在潜在性EBV感染,此为高危癌前病变,需密切监测并随访,以便早期确诊并治疗鼻咽癌。本研究中可能因流行病学、实验样本数量等因素影响,结果存在一定片面性,但结果与以往报告结果相符[3],提示,改良EBER原位杂交技术具有可靠性和稳定性。

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改良EBER原位杂交检测成功率高,稳定可靠,但多种因素会影响染色结果,如:①组织固定:离体组织需用中性缓冲甲醇4%充分固定,时间>6h则可,反之基因易降解,发生信号微弱或无杂交信号[4]。②预处理切片:用带正电荷且洁净度高的黏附玻片,厚度为3μm或更薄,58℃环境下,至少烤2h,用新鲜无水乙醇和二甲苯脱蜡,并在空气中晾干后,再做消化处理,以降低假阴性。③胃酶消化:胃酶对靶核酸蛋白质有包围作用,组织通透性加大,探针渗透性增加,提升杂交成功率,此为检测是否成功的关键环节[5]。消化时间根据切片厚薄、固定时间、组织种类进行确定。所以,胃酶消化温度、时间的控制相当重要。反之也会发生假阴性状况。本研究内切片厚度为2~3μm,37℃环境下,切片时间均为0.5h或以上,杂交成功[6]。④孵育杂交:将探针滴加厚,加盖玻片过程中,需注意勿产生气泡,并完好封边,让其在湿盒中平整放置进行杂交,控制杂交湿度和温度、杂交时间为3h或以上,二抗也需在同等状况下进行孵育,反之会导致无杂交信号或减弱杂交信号,进而建议用自动原位杂交仪,确保条件稳定[7]。
⑤严重控制质量和操作程序:实验过程中,操作人员需佩戴手套和口罩,准确配制PBS液体,确保洗涤时间充足。建议实验由专业专人负责,监控质量,以确保实验结果稳定、理想。

综上,临床检查鼻咽肿瘤病理状况可考虑采用改良EBER原位杂交技术,操作简单,稳定性好,杂交时间短,灵敏度和准确性高,可为临床鉴别和诊断鼻咽肿瘤提供依据。

参考文献

[1]彭大云,张伟,陈晓东,等.改良EBER原位杂交技术在鼻咽肿瘤病理诊断中的应用[J].实用医技杂志,2017,24(7):723-724.
[2]王弦.显色原位杂交技术在石蜡切片EBER检测中的应用[J].中国卫生标准管理,2018,10(3):128-130.
[3]吴国谦,毛志强,叶贝华.鼻咽癌患者外周血及肿瘤原发部位病毒检测的临床意义[J].中国肿瘤临床与康复,2015,10(7):789-791.
[4]张燕林,曹敏,余小蒙,等.淋巴结转移性鼻咽癌针吸检查中细胞块样本的应用[J].诊断病理学杂志,2016,23(11):821-824.
[5]Tsai S,Jin Y,Su I.Expression of EBER1 in primary and metastatic nasopharyngeal carcinoma tissues using in situ hybridization:A correlation with WHO histologic subtypes[J].Cancer,2015,77(2):231-236.
[6]陈应智,储兵,曾玉梅,等.CK、P63与原位杂交EBER在诊断复发性鼻咽癌中的应用[J].齐齐哈尔医学院学报,2015,10(6):787-789.
[7]Tsai S,Jin Y,Mann RB,et al.Epstein‐barr virus detection in nasopharyngeal tissues of patients with suspected nasopharyngeal carcinoma[J].Cancer,2015,82(8):1449-1453.

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